Мутации дупликации экзонов представляют большой интерес для CureDuchenne, и в прошлом году CureDuchenne были профинансированы исследования, направленные конкретно на эти мутации при болезни Дюшенна.
Dr. Kevin Flanigan из Nationwide Children’s Hospital успешно завершил первый этап своего исследования (см. ниже).
CureDuchenne будет продолжать финансировать эту работу в 2013 году. Тремя составляющими данного проекта являются:
1. Увеличение численности mdx- мышей с дупликациями
Dr. Flanigan и команда успешно вывели мышей, несущих дупликацию 2 экзона в локусе МДД, и в настоящее время они увеличивают количество модельных мышей с такой мутацией. Такое расширение колонии модельных мышей необходимо для получения количества животных, достаточного для обеспечения интерпретируемого анализа любых экспериментов.
2. Характеризация пропуска дупликаций в линиях человеческих фибробластов
Команда Dr.Flanigan продемонстрировала успешный пропуск множества одно-и двухэкзонных дупликаций в линиях клеток, выделенных у пациентов. Его группа в настоящее время проводит эксперименты, инъецируя эти клетки mdx-животным с целью определения возможности использования этих моделей с приживленными клетками для изучения эффекта AON — терапий, направленных конкретно на мутации дупликации.
3. Определение эффективности U7 snRNA-опосредованной технологии пропуска экзонов при мутациях дупликации.
AAV векторы, несущие U7 snRNA конструкции, ориентированные на конкретные экзоны, продемонстрировали эффективность пропуска экзонов на животных моделях. Группа Dr. Flanigan разработала U7-AAV векторы для исследований как на клеточных линиях, так и на mdx- мышах с дупликациями экзона 2, которые будут проведены в течение следующего года.
Отчет за первый год изучения mdx-мышей с мутациями дупликации
Группа Dr. Kevin Flanigan из Nationwide Children’s Hospital разработала новую модель мышей с МДД, несущих дупликацию экзона 2. Это наиболее частая мутация дупликации экзона у пациентов с Дюшенна. Предварительные исследования показывают, что у этих мышей не вырабатывается дистрофин и имеются значительные патологии мышц. Проводимые в настоящее время исследования дадут детальную информацию о степени тяжести аномалий мышц у мышей, а также о том, сможет ли быть обеспечен надежный пропуск одной копии дуплицированного экзона. Эта стратегия важна для проверки предполагаемого результата, при котором пропуск одной копии дуплицированного экзона должен привести к синтезу совершенно нормального белка дистрофина.
Группа доктора Flanigan разработала также иммортализированые («бессмертные», т.е способные размножаться бесконечно — прим. Garry) линии клеток пациентов с дупликациями в гене дистрофина. Эти клеточные линии будут использоваться в качестве инструмента для тестирования пропуска экзонов при мутации дупликации. На сегодняшний день Dr. Flanigan и его команда создали 19 клеточных линий с дупликациями от пациентов с Дюшенна, и будет увеличивать количество клеточных линий для исследований.
Третья цель этого проекта заключалась в определении эффективности вирус-векторо-опосредованного пропуска экзонов (с использованием AAV-U7 snRNA, в отличие от AON) при мутациях дупликации. Его команда создала несколько U7 векторов, использующих различные целевые последовательности для индуцирования пропуска экзона 2. Эти вирусные конструкции проходят тестирование как на myoD-трансдифференцированных фибробластах пациентов, так и на модельных мышах новой линии.
Источник: miopatia.ru