Пять из шести людей с конечностно-поясной миодистрофией типа 2D вырабатывали белок с помощью новых генов
Коротко:
- Исследование (проведённое с участием 6 пациентов, и состоявшее из двух этапов) переноса гена альфа-саркогликана в мышцу ступни у людей с КПМД 2D показало, что пятеро из шести стали производить белок альфа-саркогликан в мышце, в которую был введён ген.
- На первом этапе исследования были взяты биопсии мышц участников через 6 недель или через 3 месяца, тогда как на втором этапе биопсии брались через 6 месяцев, чтобы оценить долговременные эффекты переноса гена.
- Один человек, участвовавший во втором этапе исследования, развил существенный иммунный ответ против средства доставки на основе AAV1, использованного для переноса гена альфа-саркогликана; причиной этого могла быть перенесённая в прошлом вирусная инфекция.
- Исследователи говорят, что они собираются продолжить свою работу, перейдя к испытаниям доставки генов альфа-саркогликана во всю конечность у пациентов с КПМД 2D.
Результаты первой фазы исследования генной терапии для конечностно-поясной мышечной дистрофии (КПМД) формы 2D показали устойчивое производство белка из перенесённых генов у двоих из трёх участников через шесть месяцев после инъекции генов в мышцу стопы.
В прошлом году были объявлены результаты по итогам части данного исследования, согласно которым было продемонстрировано производство белка из перенесённых генов у первых трёх участников либо через 6 недель, либо через 3 месяца после переноса.
Ген, доставленный в клетки в данном исследовании, кодирует мускульный белок под названием альфа-саркогликан, отсутствующий у людей с КПМД 2D.
Вызвало тревогу то, что у одного участника из трёх, у которых брали биопсию через 6 месяцев после инъекции, обнаружены следы иммунного ответа против вирусного вектора, использованного для доставки гена. Это средство доставки является производным от аденоассоциированного вируса типа 1 (AAV1).
Исследователи заняты реализацией планов по испытаниям доставки генов альфа-саркогликана во всю конечность у пациентов с КПМД 2D.
О новых открытиях
Невролог Джерри Мендель (Jerry Mendell) из Всенациональной детской больницы в Коламбусе, Огайо (Nationwide Children’s Hospital in Columbus, Ohio) координировал команду исследователей, которая опубликовала свои выводы онлайн 28 октября 2010 года в «Анналах неврологии» (Annals of Neurology). Мендель, получивший поддержку от MDA на это исследование, руководит клиникой MDA и Центром генной терапии (Center for Gene Therapy at Nationwide).
Новые данные касаются результатов исследований биопсий мышц у трёх пациентов с КПМД 2D, которые получили инъекции генов альфа-саркогликанов, заключённых в средства доставки на основе AAV, в мышцу одной ступни и инъекцию физраствора в соответствующую мышцу другой ступни.
Через шесть месяцев после того, как были сделаны инъекции, у двоих из трёх участников обнаружена устойчивая выработка белка альфа-саркогликана в той мышце ступни, в которую была сделана инъекция. Однако, у одного пациента выработка не началась.
В предыдущей статье, опубликованной онлайн в апреле 2009 года в «Анналах неврологии», отмечалась хорошая выработка белка альфа-саркогликана в мышце ступни, в которую была сделана инъекция, у первых трёх участников этого исследования первой фазы. Биопсии этих трёх участников брались через 6 недель (у двоих) или 3 месяца (у одного) после инъекций. (См. LGMD gene therapy trial first to show promise beyond safety alone).
В отчёте 2009 года не было отмечено неблагоприятных эффектов, и выработка белка альфа-саркогликана была в 4-5 раз больше в мышце, в которую ввели ген, по сравнению с мышцей, в которую вводили физраствор.
Тогда исследователи отметили, что
- белок альфа-саркогликан явно занял правильное место в мембране мышечных волокон;
- что белки-спутники (ассоциированные белки) правильно присоединились к нему;
- и что размер мышечного волокна увеличился у человека, чья биопсия была взята через 3 месяца после лечения.
В той первой тройке участников исследователи нашли некоторые свидетельства иммунного ответа против вирусного средства доставки у одного человека, но они были признаны незначительными.
В новой статье исследователи отчитываются о результатах другой тройки участников, каждый из которых подвергся биопсии мышцы стопы через 6 месяцев после инъекции, что позволило учёным сделать вывод, может ли выработка альфа-саркогликана сохраняться по истечении этого периода времени. (У каждого из шести участников исследования биопсия бралась всего по одному разу, при этом небольшая мышца стопы изымалась полностью. Поэтому невозможно сравнить состояние мышцы одного и того же пациента в разные моменты времени).
У двоих участников из тех, у кого биопсии брались через 6 месяцев, команда учёных наблюдала
- устойчивую выработку альфа-саркогликана, причём содержание белка достигало нормального уровня в мышце стопы, к которой применялось лечение;
- восстановление белков, которые в норме присоединяются к альфа-саркогликану в мембране мышечного волокна;
- и увеличение размера мышечного волокна.
У третьего человека из тех, у кого мышца стопы исследовалась через 6 месяцев, не было замечено разницы между мышцей, в которую вводили ген, и мышцей, в которую вводили физраствор.
У этого пациента, в отличие от двоих других, обнаружены свидетельства двух типов иммунного ответа (клеточного уровня и наличие антител) на средство доставки на основе AAV1. Анализы крови показали, что этот человек имеет иммунитет к AAV, возможно из-за ранее перенесённой вирусной инфекции.
Исследователи говорят, что этот тип анализов крови может быть использован для скрининга участников будущих исследований, чтобы выбрать для участия тех, для кого генная терапия будет иметь эффект.
Никаких серьёзных нежелательных эффектов не было замечено ни у одного из трёх субъектов на втором этапе этого исследования первой фазы, хотя двое заболели ангиной через 3 недели и 9 месяцев после переноса генов. (Нет никаких свидетельств того, что ангина имеет отношение к лечению).
Отличия от результатов, полученных для генной терапии миодистрофии Дюшенна
Явным отличием от недавнего отчёта об иммунном ответе на новопроизведённый белок дистрофин в испытании генной терапии при мышечной дистрофии Дюшенна (МДД) (см. Immune Response Must Be Considered in DMD Gene Therapy, здесь по-русски: http://www.miopatia.ru/forum/index.php?showtopic=2861) учёные НЕ увидели никаких свидетельств того, что участники исследования с КПМД 2D выработали иммунный ответ против новосинтезированного белка альфа-саркогликана.
В исследовании МДД был обнаружен иммунный ответ против белка дистрофина, вырабатываемого на основе перенесённых генов дистрофина, но не было свидетельств иммунного ответа против средства доставки на основе AAV.
Следующим шагом в генной терапии КПМД 2D будет доставить ген альфа-саркогликана во всю конечность, с током крови. Мендель получил грант от MDA на достижение этой цели в лечении данного заболевания.
Значение для людей с КПМД 2D
Учёные говорят, что, по их мнению, иммунный ответ одного пациента на средство доставки на основе AAV1 не является проблемой серьёзной настолько, чтобы остановить продвижение в разработке доставки генов альфа-саркогликана во всю конечность, хотя это, скорее всего, приведёт к изменению критериев, которые используются для отбора участников для таких исследований с бОльшими дозами.
«Благоприятные в целом выводы в этом клиническом исследовании закладывают фундамент для дальнейших шагов в генной терапии, которые могут быть сделаны для пациентов с КПМД 2D», пишут исследователи в статье в октябре 2010. Они говорят, что исследование «открывает двери для будущей безопасной и эффективной доставки гена саркогликана с током крови».