Рейтинг@Mail.ru
Разработка вестерн-блот-метода для количественной оценки человеческого белка дистрофина в клинических испытаниях этеплирсена фазы II и III.

Разработка вестерн-блот-метода для количественной оценки человеческого белка дистрофина в клинических испытаниях этеплирсена фазы II и III.

Объект:

Фосфордиамидатморфолиноолигомер (PMO), этеплирсен, получивший ускоренное одобрение в США для пациентов с мутациями гена дистрофина, пригодными для пропуска экзона 51, наряду с другими исследуемыми олигонуклеотидами в поздних стадиях клинических испытаний, нацелен на создание продуцируемого внутри организма белка дистрофина.

Обзор:

Миодистрофия Дюшенна (МДД) в первую очередь вызвана делецией целых экзонов, что приводит к сдвигу рамки считывания мРНК, которая препятствует продуцированию функционального белка дистрофина. Вестерн-блоттинг традиционно использовался в качестве подтверждающего теста для клинического диагноза МДД или мышечной дистрофии Беккера (БМД), но метод не стандартизирован и не имеют истинной количественной оценки.

Дизайн / Методы:

Чувствительный и полуколичественный метод Вестерн-блоттинга был разработан для обнаружения дистрофина при биопсии мышц человека с использованием стандартной кривой, состоящей из мышечного лизата здоровых лиц (нормального контроля), добавленного в лизат мышц МДД для поддержания эквивалентной белковой нагрузки. Запуск стандартной 5-точечной кривой в диапазоне от 0,25% до 4% от одного нормального контроля на каждом геле позволяет рассчитать уровни дистрофина для неизвестных образцов, которые работают на одном и том же геле, и позволяет нормализовать небольшие колебания интенсивности сигнала дистрофина между гелями.
Время экспозиции гарантирует, что сигнал дистрофина не перенасыщен и остается в динамическом диапазоне анализа.

Результаты:

В промежуточном анализе после 48 недель лечения в клиническом исследовании III фазы этеплирсена у 12 пациентов с биопсией было выявлено значительное увеличение среднего количества дистрофина в результате вестерн-блоттинга после лечения по сравнению с их биопсией до лечения (P <0,05). Этот метод позволил подтвердить среднее увеличение производства дистрофина после лечения этеплирсеном.

Выводы:

Метод вестерн-блоттинга был подтвержден в соответствии с существующими нормативами и может обеспечить подтверждение механизма действия для восстановления дистрофина. Разработанный метод обеспечивает чувствительную и надежную количественную оценку дистрофина от «нормальных» уровней до 0,25%.

Источник МойМио

Даша – инвалид с рождения. Эта девочка не знает, что такое жизнь без боли. У Даши — ДЦП, гемиплегия III степени и судорожный синдром.

Похожие сообщения

Оставьте отзыв

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Введите правильный ответ: *