Терапевтическое использование CRISPR / Cas9 системы при мышечной дистрофии Дюшенна

1istock_000016298765small3

Недавно разработанная технология с высокой точностью модификации генома на основе защитного механизма прокариот, называемая система кластерного, регуляторного, заполняющего промежутки, короткого палиндромного повтора (CRISPR), была использована в качестве инструмента для программируемй генной модификации с высокой точностью у эукариот. До сих пор было показано, что инактивация генов очень эффективна, однако мало что известно о редактировании генов и регуляторных возможностях этой системы. В качестве доказательства концепции мы использовали CRISPR / Cas9 систему для изучения трех различных терапевтических подходов для терапии мышечной дистрофии Дюшенна (МДД), разрушительного Х-хромосоного расстройства.

Первый подход направлен на приблизительно 26% пациентов, которые имеют точечные мутации в гене дистрофина Здесь мы использовали редактирование гена DMD E2035X, патогеной мутации в МДД миобластах пациентов. Мы были способны генерировать целевые двухцепочечные разрывы ДНК, которые были устранены с помощью гомолоов направленного восстановления с использованием одноцепочечных олигонуклеотидов, несущих скорректированую последовательность ДНК.

Другие патогенные мутации МДД — дубликации, которые обнаруживаются примерно у 13% пациентов с МДД. Используя модифицированую стратегию CRISPR мы удалили 145 кб (Экзоны 18-30) дублирования и восстановленное экспрессию дистрофина в клетках пациентов. Кроме того, в качестве универсального, мутации-независимого подхода к лечению, мы также использовали третью модифицированую систему CRISPR, чтобы активировать экспрессию атрофинадля компенсации потери дистрофина. В МДД миобластах пациентов, мы использовали S.pyogenes Cas9, слитый с активатором транскрипции VP160 целевого промотора атрофина. Мы показали, увеличение активации атрофина в 2,5-5 раза и в результате повышенной экспрессии дистрогликана для подтверждения функциональной значимости этой стратегии.

ЧИТАЙТЕ ТАК ЖЕ:  Пенсию в Беларуси можно будет получить только в банке, а не на почте. Кого это коснется?

Наконец, для того, чтобы определить, имеет ли этот инструмент потенциальное клиническое значение, мы стали опробовали CRISPR систему / Cas9 на дистрофин-дефицитных мышах MDX. Мы разработали стратегию для доставки CRISPR с помощью РААВ с целью достижения редактирования дистрофина и активации атрофина одновременно в естественных условиях. Взятые вместе наши концептуальные исследования дают представление о потенциально далеко идущих последствиях терапевтических преимуществ CRISPR системы, которые могут быть адаптированы к разнообразным мутациям при МДД.

http://www.distrofiamuscular.net

Источник МойМио

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *